賽默飛2720PCR儀是一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中，以熒光化學(xué)物質(zhì)測每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法。通過內(nèi)參對待測樣品中的特定DNA序列進(jìn)行定量分析的方法。

 

　　數(shù)字PCR是近年來迅速發(fā)展起來的一種定量分析技術(shù)。該技術(shù)結(jié)果判定不依賴于擴(kuò)增曲線的循環(huán)閾值（Ct），不受擴(kuò)增效率的影響，具有很好的準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性，并且可以實(shí)現(xiàn)定量分析。數(shù)字PCR已經(jīng)在核酸檢測、鑒定等研究領(lǐng)域顯示出巨大的技術(shù)優(yōu)勢和應(yīng)用前景。

 

　　定量PCR是依靠標(biāo)準(zhǔn)曲線或參照基因來測定核酸量，而數(shù)字PCR則讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個數(shù)，是對起始樣品的定量。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應(yīng)用領(lǐng)域：拷貝數(shù)變異、突變檢測、基因相對表達(dá)研究（如等位基因不平衡表達(dá)）、二代測序結(jié)果驗(yàn)證、miRNA表達(dá)分析、單細(xì)胞基因表達(dá)分析等。

 

　　賽默飛2720PCR儀技術(shù)中為什么3次循環(huán)才能得到目的基因？

 

　　1、第1個循環(huán)擴(kuò)增出來的新片段很長很長。

 

　　2、第2個循環(huán)以新的長片段為模板進(jìn)行，但新片段的一端是引物開頭的，所以第2個循環(huán)得到的片段就是我們需要的長度，但只是一條鏈，所以還不能分離出目的基因。

 

　　3、第3個循環(huán)，當(dāng)以第2個循環(huán)得到的新片段為模板時，因?yàn)檫@個片段的長度就是需要擴(kuò)增的長度，當(dāng)?shù)谌齻€循環(huán)完成時，這個片段是需要的長度，且是雙鏈DNA，這就得到了需要的目的基因了。